高效液相色谱仪作为一种分离分析方法,应用广泛,具有分析效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度高等优点。液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。 高效液相色谱仪的工作流程:贮液器中经过滤的流动相由高压输液泵以稳定的流速或压力输送到色谱柱入口;(若采用梯度淋洗方式常需双泵系统完成流动相的输送)样品由进样器自进样口注入后随流动相流经色谱柱,在色谱柱中完成组分分离。分离后的组分随流动相离开色谱柱依次进入检测器,检测器将检测到的信号输给记录仪(工作站)或其它数据处理系统记录、处理和保存。
高效液相色谱仪进样和输液系统分析:
进样系统:一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。
输液系统:
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。